CCK8实验原理是什么如何操作

CCK8实验：探究细胞增殖与毒性的黄金法则

你是否曾经好奇过如何量化细胞的增殖与活性？CCK8实验，一种基于WST-8的快速、高灵敏度检测试剂盒，正是解答这一问题的关键。让我们深入了解其背后的原理与操作过程。

CCK8实验原理介绍

CCK8，全称为Cell Counting Kit-8，其核心工作原理依赖于WST-8这一化学试剂。在电子耦合试剂的协助下，WST-8仅在活细胞中发生反应，被细胞内的脱氢酶还原成黄色甲瓒产物。这种产物的数量与活细胞的数量成正比。换句话说，甲瓒物的积累直接反映了细胞的活性与数量。而这一过程可以通过酶标仪测量特定波长（如450nm）处的光吸收度（OD值）来量化。

实验操作详解

1. 细胞悬液的准备：无论是悬浮细胞还是贴壁细胞，首先要制备成细胞悬液。对于贴壁细胞，需要使用胰酶进行消化。之后，用含血清的培养基重悬细胞，并进行计数，调整至适当的细胞浓度。

2. 细胞的接种：将细胞悬液接种到96孔板中，并设置不同的浓度组、空白组及对照组。这一步是为了确保实验的多样性和准确性。

3. 细心培养：将接种好的细胞放入培养箱中预培养一段时间，让细胞适应新环境并贴壁生长。

4. 加入CCK8试剂：在预定的时间点，向各孔中加入CCK8试剂，让试剂与细胞充分接触。这一步需要格外小心，避免产生气泡影响后续的光吸收度测量。

5. 测定吸光度：加入试剂后，继续孵育一段时间，然后在酶联免疫仪上测量特定波长的吸光度值。这些数值将为我们提供关于细胞增殖和毒性的关键信息。

完成上述步骤后，你就可以根据测得的OD值进行细胞增殖和毒性的分析。CCK8实验以其高度的灵敏度和准确性，成为生物学研究中不可或缺的工具。无论是科研人员还是学生，都可以通过这一实验深入探究细胞的奥秘，为生物医学领域的研究做出有意义的贡献。